蛋白质组学技术专家
定性蛋白组
复杂蛋白鉴定

  LC-ESI-MS/MS液相色谱串联电喷雾质谱是一种鉴定复杂蛋白质大分子的方法,液相色谱是一种准确度高,分离范围广的快速分离方法,它对化合物的结构破坏性小,适合有机分子和生物分子的分离。质谱具有其他分析方法无可比拟的灵敏度,对于未知化合物的结构分析定性十分准确,对相应的标准样品要求也比较低。质谱可以和气相联用如GC/MS,也可以和高效液相色谱联用如HPLC/MS。由于色谱和质谱灵敏度相当,再加上分离效果很好的色谱可以作为质谱的进样系统,质谱作为色谱的鉴定仪速度快,分离好,应用广。色谱-质谱联用成为最好的用于分析微量有机混合物的仪器。

  在1970年后,质谱-质谱法(mass separetion-mass spectra Characterization)迅猛发展起来。这种方法让母离子进一步裂解,从而获得裂解过程和分子结构的信息,通常称为串联质谱,二维质谱法,序贯质谱等。质谱的分析建立在物质离子化的基础上,按照荷质比分离离子,通过测量离子谱峰的强度实现分析目的。通过色谱纯化后的样品气化离子化形成的离子在电场和磁场的综合作用下,按照质量数和电荷数的比值大小依次排列成谱被记录下来。常见的质谱图的纵坐标是离子信号强度,横坐标就是离子核质比。

  在液相色谱质谱中通常所用的离子源有ESI和APCI,常用的是ESI(Electron spray Ionization)。ESI 是比APCI软电离程度较小的电离方式,应用范围较APCI 的大,只有少部分有机分子ESI 做不出,可以用APCI 辅助解决问题。ESI电喷雾电离源是一种软电离方式,即便是分子量大,稳定性差的化合物,也不会在电离过程中发生分解,它适合于分析极性强的大分子有机化合物,如蛋白质、肽、糖等。电喷雾电离源的最大特点是容易形成多电荷离子。这样,一个分子量为10000Da的分子若带有10个电荷,则其质荷比只有1000Da,进入了一般质谱仪可以分析的范围之内。根据这一特点,目前采用电喷雾电离,可以测量分子量在300000Da以上的蛋白质。

应用领域
  • 蛋白质或多肽鉴定(从胶条、胶点、细胞/组织裂解液、免疫沉淀/PullDown产物以及蛋白混合物中鉴定500-2000种蛋白)

技术优点
  • 准确性高、灵敏度高、分离能力强

  • 速度快、通量高、自动化程度高

  • 兼容性强,可分析胶条、细胞/组织裂解液、亚细胞分离组分等,适合复杂的蛋白质样品

样品要求
样品类别样品要求其他
双向凝胶电泳胶点考染、银染点清晰可见

银染过程中未使用戊二醛作为固定剂

用去离子水防干,干冰或冰袋寄送

SDS-PAGE胶条

考染、银染点条带清晰可见


银染过程中未使用戊二醛作为固定剂

用去离子水防干,干冰或冰袋寄送

蛋白质溶液

蛋白质总量>5μg,浓度>0.1μg/μl

缓冲液不含去污剂NP40、Trioton X-100等

挥发性盐<20mM,无PBS、SDS和尿素等物质

干冰或冰袋寄送

蛋白质干粉

蛋白质总量>5μg,浓度>0.1μg/μl

干冰或冰袋寄送
细胞样品细胞数目>1x10^6/样品干冰或冰袋寄送
组织样品样品总量>200mg/样品干冰或冰袋寄送
体液样品血清>200μl、尿液>1ml、泪液>1ml干冰或冰袋寄送

*需详细填写样品来源、含量、状态和其他信息

最终交付
  • 鉴定报告一份

服务周期
  • 样品确认后20个工作日

仪器平台
  • AB Sciex TripleTOF 5600


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