蛋白质组学技术专家
定量蛋白组
iTRAQ定量

  同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ) 技术由AB SCIEX公司研发的一种体外同种同位素标记的相对与绝对定量技术。该技术利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团,经高精度质谱仪串联分析,可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量,是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术。

  iTRAQ技术采用4种或8种同位素编码的标签,通过特异性标记多肽的氨基基团,而后进行串联质谱分析,可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量或绝对含量。将蛋白质裂解为肽段,然后用iTRAQ试剂进行差异标记。iTRAQ试剂包括3个部分:报告基团(report group)、平衡基团(balance group)和肽反应基团(amine-specific reactive group)。报告基团相对分子质量为113-121Da(无120),因此iTRAQ 试剂可同时标记8组样品。平衡基团相对分子质量为192-184Da(无185),使得八种iTRAQ试剂分子量均为305Da,保证标记的同一肽段m/z相同。肽反应基团将iTRAQ试剂与肽段上赖氨酸及N端氨基酸残基相连,在其上报告基团通过平衡基团与反应基团相连,形成等量异位标签。由于iTRAQ试剂是等量的,即不同同位素在标记同一多肽后在第一级质谱检测,分子量完全相同,用串联质谱方法对在第一级质谱检测到前体离子(precursor ion)进行碰撞诱导解离,产物离子通过第二级质谱进行分析。在二级质谱分析过程中,报告基团、质量平衡基团和多肽反应基团之间的键断裂,质量平衡基团丢失,产生低质荷比(m/z)的报告离子。由于二级质谱可分析相对分子质量相差1的报告基团,不同报告基团离子强度的差异就代表了它所标记的多肽的相对丰度。同时,多肽内的酰胺键断裂,形成一系列b离子和y离子,得到离子片段的质量数,通过数据库查询和比较,可以鉴定出相应的蛋白质前体。    

应用领域
  • 机理和调控机制研究

  • 动态过程中机制研究

  • 疾病标志物的筛选

  • 用药及预后标志物筛选

  • 不同组织、细胞、体液或生物体样品不同状态下的差异蛋白比较


技术优点
  • iTRAQ可于一次实验中同时标记4至8个的样品,操作简单快速,减少多次质谱检测中产生的系统误差。适用于对多个样品进行高通量的检测,实验设计更加灵活。

  • iTRAQ是在肽段水平上进行的体外标记,几乎适用于所有类型的生物样本。

  • 重现性好、灵敏度高、定性与定量可同时进行。

  • 检测限低,可检测出低丰度蛋白。




样品要求
样品类别样品要求其他
蛋白质溶液蛋白质总量>300μg,浓度>1μg/μl(每组样品)

干冰或冰袋寄送

蛋白质干粉

蛋白质总量>300μg,浓度>1μg/μl(每组样品)

干冰或冰袋寄送
细胞样品细胞数目>1x10^7/每组样品干冰或冰袋寄送
组织样品样品总量>200mg/每组样品干冰或冰袋寄送
体液样品血清>200μl、尿液>1ml、泪液>1ml干冰或冰袋寄送

*需详细填写样品来源、含量、状态和其他信息

最终交付
  • 鉴定报告一份

服务周期
  • 样品确认后40个工作日

仪器平台
  • Thermo Scientific LTQ Orbitrap

  • AB sciex TripleTOF 5600

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