蛋白质组学技术专家
定量蛋白组
SILAC定量

  SILAC即细胞培养条件下稳定同位素标记技术stable-isotope labelling by amino acids in cell culture。它的原理很简单:两组细胞同时培养,A组是在包含正常氨基酸(light)的培养基中;B组的培养基则含有“重型(heavy)”的氨基酸,即稳定同位素标记的氨基酸。最初SILAC使用的标记氨基酸是氚代甲硫氨酸和氘代甘氨酸,目前常用的标记氨基酸有亮氨酸、精氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸和酪氨酸等。细胞传代若干代后,稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到蛋白中,取代了原有的氨基酸。这样,两个蛋白之间就存在分子量的改变,而其它化学性质无异。然后将两组细胞混合,提取出蛋白质组,并交给质谱去测定。每个肽段作为质谱中的一对——低分子量的肽段含有轻型氨基酸,来源于A组,高分子量的肽段则含有重型氨基酸,来源于B组。如果SILAC肽段对呈现1:1的比例,则蛋白质组中此蛋白的丰度无差异。如果含有重型氨基酸的肽段峰强度偏高,则说明B组中蛋白丰度更高。因为稳定同位素标记的氨基酸与天然氨基酸的化学性质基本相同,除了分子量差异,则质谱上峰强度的比值直接对应了A组与B组的比例。




应用领域
  • 机理和调控机制研究

  • 动态过程中机制研究

  • 疾病标志物的筛选

  • 用药及预后标志物筛选

  • 只适用于活体培养的细胞蛋白质定量


技术优点
  • 标记率高:活细胞水平标记技术,标记效果稳定,其标记效率不受裂解液的影响。标记效率可高达100%。

  • 灵敏度高:样本需求量少,通常每个样品只需要几十微克的蛋白量。

  • 通量高:采用质谱定量,可同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质。

  • 精度高:多个样品混合后同时进行分离、酶切和鉴定,后续实验对样品的影响是一致的,减少了实验操作和仪器设备产生的影响,具有更高的精密度和重现性。

  • 活性高:标记采用的是体内标记技术,更接近样品真实状态。





样品要求
样品类别样品要求其他
蛋白质溶液蛋白质总量>100μg,浓度>1μg/μl(每组样品)

干冰或冰袋寄送

蛋白质干粉

蛋白质总量>100μg,浓度>1μg/μl(每组样品)

干冰或冰袋寄送
细胞样品细胞数目>1x10^7/每组样品干冰或冰袋寄送

*需详细填写样品来源、含量、状态和其他信息

最终交付
  • 鉴定报告一份

服务周期
  • 样品确认后60个工作日

仪器平台
  • Thermo Scientific LTQ Orbitrap

  • AB sciex TripleTOF 5600

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