蛋白质组学技术专家
定量蛋白组
Label-free非标定量
  非标定量法(Labelfree)是近年来重要的质谱定量方法,通过比较质谱分析次数或质谱峰强度,分析不同来源样品蛋白的数量变化。该技术无需昂贵的同位素标签做内标,提高了低丰度蛋白质的检测效率和蛋白质定量的准确性,广受科研工作者的推崇。
  非标定量法( Label-free) 是通过比较质谱分析次数或质谱峰强度,分析不同来源样品蛋白的数量变化,认为肽段在质谱中被捕获检测的频率与其在混合物中的丰度成正相关, 因此蛋白 质被质谱检测的计数反映了蛋白质的丰度,通过适当的数学公式可以将质谱检测计数与蛋白质的量联系起来,从而对蛋白质进行定量。按照其原理主要分为两种,第一种spectrum counts类的非标记方法,发展比较早,已经形成多种定量算法,但是主要的原理都是以MS2的鉴定结果为定量基础,各种方法的差别在于后期算法在大规模数据上的修正。第二种非标记定量的原理是以MS1为基础,计算每个肽段的信号强度在LC-MS上的积分。
  目前,已经有一系列配套的非标记定量分析软件,其中包括的GE公司开发的DeCyder MSTM商业化软件,领先的蛋白质组学定性定量算法MaxQuant。运用这些软件,对液相色谱串联质谱数据非标记定量分析是将质谱数据由谱峰形式转化为直观的类似双向凝胶的图谱,谱图上每一个点代表一个肽段,而不是蛋白质;再比较的不同样本上相应肽段的强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。实践证明其具有很好的定量准确性和可信性,现在已经逐渐成为蛋白质组学领域内的标准解决方案。

应用领域
  • 机理和调控机制研究

  • 动态过程中机制研究

  • 疾病标志物的筛选

  • 用药及预后标志物筛选

  • 不同组织、细胞、体液或生物体样品不同状态下的差异蛋白比较


技术优点
  • 无需昂贵的同位素标签做内部标准,实验耗费低。

  • 对样本的操作最少,从而使其最接近原始状态。

  • 不受样品条件的限制,克服了标记定量技术在对多个样本进行定量方面的缺陷。

  • 对实验操作稳定性、重复性要求高,要求至少做三次技术重复或生物重复;

  • 准确性较标记定量差,对液相色谱串联质谱的稳定性和重复性要求较高。



样品要求
样品类别样品要求其他
蛋白质溶液蛋白质总量>300μg,浓度>1μg/μl(每组样品)

干冰或冰袋寄送

蛋白质干粉

蛋白质总量>300μg,浓度>1μg/μl(每组样品)

干冰或冰袋寄送
细胞样品细胞数目>1x10^7/每组样品干冰或冰袋寄送
组织样品样品总量>200mg/每组样品干冰或冰袋寄送
体液样品血清>200μl、尿液>1ml、泪液>1ml干冰或冰袋寄送

*需详细填写样品来源、含量、状态和其他信息

最终交付
  • 鉴定报告一份

服务周期
  • 样品确认后40个工作日

仪器平台
  • Thermo Scientific LTQ Orbitrap

  • AB sciex TripleTOF 5600

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